Tampão TAE
Tampão TAE (tampão Tris-Acetato-EDTA) é uma solução tampão usada em eletroforese em agarose, tipicamente para a separação de ácidos nucleicos tais como o DNA e RNA.[1] Ele é feito de tampão acetato da base Tris, normalmente a pH 8.0, e EDTA, os quais sequestram cátions divalentes. TAE tem uma mais baixa capacidade que TBE e facilmente pode se exaurir, mas DNA de dupla cadeia linear migra mais rápido em TAE.
Usos editar
Tampão TAE é usado tanto como um tampão de corrida como em gel de agarose.[2] TAE tem sido usado em várias concentrações para estudar mobilidade de DNA livre com e sem cloreto de sódio.[3] Métodos em eletroforese em gel em gradiente denaturado para análise de mutações em amplo espectro têm sido também descritos.[4]
Formulação editar
Tampão TAE (50x)
- 242 g TRIS base (2-amino-2-hidroximetil-propano-1,3-diol) (= 2 moles)
- 57,1 ml ácido acético glacial
- 100 ml de solução de EDTA dissódico (Na2 EDTA) 0,5 M (pH 8.0)
- Água destilada até 1 litro
Para preparar solução a 0.5 M de Na2 EDTA (pH 8.0) adicionar 18,612 g de etilenodiaminotetraacetato dissódico a 80 mL de água destilada. Agitar vigorosamente. Ajustar o pH a 8,0 com hidróxido de sódio, NaOH (aprox. 1,8 g de NaOH. Terminar ajuste adicionando gotas de NaOH 10N durante a medição de pH). Acertar o volume final para 100 mL. Esterilizar por autoclavagem.
Observação. O sal dissódico do EDTA não irá permanecer em solução até o pH da solução ser ajustado a aproximadamente 8,0 pela adição de NaOH.
Referências editar
- ↑ Ogden, R.C., and Adams, D.A., Electrophoresis in agarose and acrylamide gels. Methods Enzymol., 152, 61-87 (1987).
- ↑ Sambrook, Fritsch, and Maniatis (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, volume 3, apendices B.11 and B.23
- ↑ Stellwagen, E., and Stellwagen, N.C., The free solution mobility of DNA in Tris-acetate-EDTA buffers of different concentrations, with and without added NaCl. Electrophoresis, 23(12), 1935-1941 (2002).
- ↑ Hayes, V.M. et al., Improvements in gel composition and electrophoretic conditions for broad-range mutation analysis by denaturing gradient gel electrophoresis. Nucleic Acids Res., 27(20), e29 (1999).
