Sequenciamento de DNA: diferenças entre revisões

Pelo [[método de Sanger]], uma fita simples de [[DNA]] que será sequenciada, é hibridizada com um [[Primário (tinta)]] de desoxinucleotídeos marcado na ponta 5´ (cinco linha). Quatro misturas de reação são preparadas onde os ''Primário (tinta)s'' utilizados serão elongados por uma [[DNA polimerase]]. Cada mistura contém os quatro desoxinucleosídeos trifosfato normais mais um dos quatro didesoxinucleosídeos trifosfato em uma razão de aproximadamente 1/100. Uma vez que um didesoxinucleotídeo não tem ponta 3´-OH, não é possível haver elongação a partir do nucleotídeo adicionado, parando a reação. Desta forma, cada mistura de reação produzirá cadeias prematuramente terminadas de acordo com toda ocorrência de um didesoxinucleotídeo adicionado. Cada mistura é então separada em um gel de sequenciamento por [[eletroforese]] para se detectar cada um dos nucleotídeos presentes na sequência de DNA lida.