Enzima de restrição: diferenças entre revisões
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As '''enzimas de restrição''' ou '''endonucleases de restrição''' como também são conhecidas, são [[enzima]]s que cortam a molécula de [[DNA]] através do reconhecimento de sequências nucleotídicas específicas.
== Modo de funcionamento ==
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Além de evidenciar a existência de um novo sistema de defesa bacteriana e da complexa interação entre bactéria e vírus parasitas, a descoberta das enzimas de restrição permitiu grandes avanços na [[Genética Molecular]]. Por isso, os três pesquisadores responsáveis pela elucidação do mecanismo de ação das endonucleases de restrição, o suíço [[Werner Arber]] (n. 1931) e os norte-americanos [[Daniel Nathans]] (1928-1999) e [[Hamilton Smith]] (n.1931), receberam o Prêmio Nobel em Medicina ou Fisiologia em 1978.
Moléculas idênticas de DNA tratadas com determinada endonuclease de restrição são cortadas nos mesmos pontos, originando fragmento de tamanho idênticos. Por exemplo, no primeiro estudo com endonuclease de restrição, realizado em 1971, o virologista Daniel Nathans e uma de suas estudantes, [[Kathleen Danna]], trataram DNA do vírus [[SV40]] com a enzima ''[[Hind II]]'' e obtiveram 11 tipos de fragmentos, que diferiam em tamanho. Como o DNA desse vírus é uma molécula circular, conclui-se que ela foi cortada em 11 locais; o tamanho de cada fragmento correspondia à distância entre dois sítios de corte adjacentes.
Uma endonuclease de restrição é como uma ferramenta que permite cortar moléculas de DNA de forma controlada e reprodutível. Diversos pesquisadores passaram a utilizar a nova técnica para mapear o genoma de outros vírus, depois de bactérias e de outros organismos, lançando as bases para a [[Engenharia Genética]] e, em seguida para o [[Projeto Genoma Humano]].
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3'-[[citosina|C]][[timina|T]][[timina|T]][[Adenina|A]][[Adenina|A]][[Guanina|G]]-5'
Este tipo de segmento é chamado de um '''[[palíndromo]]''' de DNA, o que significa que ambos os filamentos têm a mesma seqüência de nucleotídeos mas com polaridade inversa. Enzimas de restrição diferentes cortam em seqüências palindrômicas diferentes. Às vezes os cortes são na mesma posição em cada um dos dois filamentos de polaridade inversa. As enzimas de restrição mais úteis fazem cortes que são desencontrados. Por exemplo, a enzima ''EcoRI'' faz cortes apenas entre os nucleotídeos [[Guanina|G]] e [[Adenina|A]] em cada filamento do palíndromo:
↓
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↑
Estes cortes desencontrados deixam um par de pontas adesivas idênticas. Cada uma é um filamento único com cinco bases de tamanho. As pontas são chamadas de ''adesivas'' porque, sendo unifilamentares, elas podem fazer pares de bases (isto é, adesão) com uma seqüência complementar. O pareamento unifilamentar deste tipo às vezes é chamado de [[hibridização]].
Dúzias de enzimas de restrição são conhecidas hoje. Algumas enzimas, tais como a ''EcoRI'' ou ''PstI'', fazem cortes perpendiculares e deixam pontas rombas. Mesmo estes cortes, que não têm pontas adesivas, podem ser usados para fazer DNA recombinante. Enzimas especiais podem unir pontas adesivas a partir de pontas rombas.
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(a) Três hexanucleotídeos como sítios de reconhecimento e as enzimas de restrição que os cortam. Note que um sítio produz uma projeção 5', outro uma 3', e o terceiro um ponta romba. (b) Exemplo de enzimas que têm sítios de reconhecimento de tetranucleotídeos.
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