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Informações acerca da Espectrofotometria, Transmitância, Absorvância, Lei de Bourguer-Lambert, Lei de Beer-Lambert e Medida da transmitância e da absorvância.
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(Informações acerca da Espectrofotometria, Transmitância, Absorvância, Lei de Bourguer-Lambert, Lei de Beer-Lambert e Medida da transmitância e da absorvância.)
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[[Ficheiro:Spektrofotometri.jpg|thumb|334px|Espectrofotômetro]]
A '''espectrofotometria''' é o método de análises óptico mais usadoutilizado nas investigações biológicas e físico-químicas. OBaseia-se [[espectrofotômetro]]na émedida umquantitativa instrumentoda queabsorção permiteda compararluz apelas radiaçãosoluções, absorvidaonde oua transmitidaconcentração porna uma [[solução]] queda contémsubstância umaabsorvente quantidadeé desconhecidaproporcional deà [[soluto]],quantidade ede umaluz soluçãoabsorvida. queEstas contémmedidas umasão quantidadeefetuadas conhecidapor daequipamentos mesmadenominados substânciaespectrofotômetros.
 
As radiações eletromagnéticas com comprimento de onda entre 380 e 750 nm são visíveis ao olho humano. A luz visível constitui uma parcela muito pequena no espectro eletromagnético. A zona do espectro cujas radiações possuem um comprimento de onda abaixo de 380 nm é denominada ultravioleta (UV). Comprimentos de onda acima de 750 nm correspondem à zona infravermelha. A visão humana detecta somente a parte visível do espectro, enquanto filmes fotográficos e fotocélulas são sensíveis a outras porções do espectro.
Todas as substâncias podem absorver energia radiante, mesmo o [[vidro]] que parece completamente transparente absorve [[comprimento de onda|comprimentos de ondas]] que pertencem ao [[espectro (física)|espectro]] visível. A [[água]] absorve fortemente na região do [[radiação infravermelha|infravermelho]].
 
Quando a luz branca (luz solar) passa através de um prisma (ou retículo de difração), ela se decompõe em raios de luz e em distintos comprimentos de onda. A projeção desses raios emitidos em um anteparo produz uma faixa de cores que vai desde o vermelho até o violeta, denominada espectro de emissão. A cor da luz é função do seu comprimento de onda. Na Tabela 1.0 são mostrados os diferentes comprimentos de onda com as respectivas características do espectro de luz visível, ultravioleta e infravermelho.
A absorção das [[radiação ultravioleta|radiações ultravioleta]], visíveis e infravermelhas dependem das estruturas das [[molécula]]s, e é característica para cada substância química.
 
As soluções são coloridas para o olho humano quando absorvem toda a luz incidente, com exceção do intervalo de comprimento de onda observado pela visão. Desse modo, uma solução azul apresenta esta cor em virtude de as demais cores que constituem o espectro terem sido absorvidas. Assim, a cor de uma solução é complementar à luz absorvida.
Quando a [[luz]] atravessa uma substância, parte da energia é absorvida ([[absorbância]]): a energia radiante não pode produzir nenhum efeito sem ser absorvida.
{| class="wikitable sortable"
|+Tabela 1.0 - Intervalos de comprimento de onda no espectro eletomagnético
!Cores
!Intervalos de comprimento de onda (nm)
|-
|Ultravioleta (não visível)
|<380
|-
|Violeta
Azul
 
Verde
A [[cor]] das substâncias deve-se à reflexão ([[transmitância]]) de certos comprimentos de ondas da luz branca que incide sobre elas, deixando transmitir aos nossos olhos apenas aqueles comprimentos de ondas não absorvidos.
 
Amarela
 
Alaranjada
 
Vermelha
|380 a 450
450 a 500
 
500 a 570
 
570 a 590
 
590 a 620
 
620 a 750
|-
|Infravermelha curta
|750 a 2000
|}
Segundo a natureza da solução examinada, obtêm-se os espectros de absorção da luz de tal modo que a imagem espectral pode servir para a identificação de uma determinada substância.
 
=== Transmitância ===
A transmitância consiste na medida da luz transmitida. Quando um raio de luz monocromática de intensidade inicial definida incide sobre uma solução colorida, a intensidade da luz emergente é menor que a luz incidente, ou seja, parte da luz foi absorvida.
 
=== Absorvância ===
A absorvância, por sua vez, consiste na medida da luz absorvida, onde mede-se a intensidade de luz absorvida por uma solução corada pela redução da medida da intensidade da luz transmitida.
 
Note que a absorvância não é uma quantidade medida diretamente, mas é obtida por meio do cálculo matemático a partir dos valores de transmitância.
 
=== Lei de Bouguer-Lambert ===
Bouguer e, em seguida, Lambert investigaram a relação entre a diminuição da intensidade de luz e a espessura do meio absorvente. Ao incidir-se um raio de luz sobre diversas camadas opticamente homogêneas e de espessuras conhecidas, observa-se uma proporção direta entre a espessura das camadas e o logaritmo da transmissão, ou a transmissão da luz decresce logaritmicamente com o aumento linear da espessura da camada. Tem-se, então, uma relação direta entre a absorvância e a espessura da camada. Quanto maior a espessura da camada, maior a absorvância, e menor a transmitância.
 
=== Lei de Beer-Lambert ===
A lei de Beer-Lambert, ou simplesmente Lei de Beer, afirma que a concentração de uma substância é diretamente proporcional à quantidade de luz absorvida ou inversamente proporcional ao logaritmo da luz transmitida.
 
Na prática laboratorial, a aplicação quantitativa da Lei de Beer é realizada pelo emprego de espectrofotômetros, onde são lidas as absorvâncias de uma solução teste e de uma solução padrão de concentração conhecida (após submetida a reações apropriadas), e a concentração do teste é calculada a partir da seguinte fórmula:
 
[Amostra] = Absorvância do teste x [Padrão] / Absorvância do padrão
 
Neste cálculo, considera-se que a espessura das cubetas que contêm as soluções lidas é constante. Esta relação só é aplicada quando a reação colorimétrica segue a lei de Beer e tanto o desconhecido como o padrão são lidos na mesma célula.
 
=== Medida da Transmitância e da Absorvância ===
A transmitância e a absorvância das soluções coloridas são medidas por meio de instrumentos denominados fotômetros. Estes instrumentos empregam como fonte luminosa uma lâmpada incandescente produtora de luz branca. Potencialmente, pode-se empregar qualquer comprimento de onda da região visível. Para a resolução da luz em determinado comprimento de onda desejado, são utilizados monocromadores que consistem em filtros interferentes ou de absorção (fotômetros de filtro), prismas ou retículos de difração (espectrofotômetros).
 
A luz atravessa uma solução colorida presente em uma cubeta; parte é absorvida (esta absorção depende da intensidade de cor da solução). A luz transmitida (detectada por uma fotocélula) tem intensidade menor que a luz incidente. A fotocélula converte a energia elétrica, emitindo um sinal que pode ser lido na escala de um galvanômetro, em percentagem de transmitância ou em absorvância.
 
A determinação da absorvância ou transmitância de uma solução torna indispensável o conhecimento da intensidade da luz incidente e emergente. São várias as dificuldades de ordem técnica para a medida absoluta da luz incidente. Considera-se então, por aproximação, a luz incidente igual em intensidade àquela emergente de uma cubeta do fotômetro contendo somente o solvente (branco).
 
Desse modo, são superadas as dificuldades da determinação direta da luz incidente, assim como ficam eliminadas a absorção e a dispersão de luz introduzidas pelas paredes das cubetas, pelo solvente e algumas impurezas.
 
Portanto, para proceder à medida da absorvância, introduz-se uma cubeta na câmara de leitura contendo o solvente (branco) e acerta-se o aparelho para que a absorvância seja zero (ou 100% de transmitância). Substitui-se o "branco" pela cubeta contendo a solução teste (ou padrão) e lê-se a absorvância da mesma.
 
=== Referência Bibliográfica ===
MOTTA, Valter Teixeira. Bioquímica clínica para o laboratório - princípios e interpretações. 5ª edição, p. 15-17. Rio de Janeiro: MedBook, 2009.
 
== Tipos ==
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