Clonagem por diluição
A clonagem por diluição ou clonagem por diluição limitante[1][2] é um procedimento para obter uma população de células monoclonais a partir duma massa de células inicialmente policlonais. Isto é possível realizando uma série de diluções cada vez maiores do cultivo celular policlonal inicial. Faz-se uma suspensão das células parentais. Depois fazem-se as diluções apropiadas, dependendo do número de células e da população inicial, assim como da viabilidade e características das células que vão ser clonadas. Depois de realizadas as diluções finais, colocam-se numa placa aliquotas da suspensão[1] ou vertem-se em frascos[2] e são incubadas. Se tudo funcionar como o planeado, produzir-se-á uma colónia de células monoclonais. Entre as aplicações deste tipo procedimento estão a clonagem de parasitas,[3] células T imunitárias,[4] células transgénicas[5] e macrófagos.[6]
Referências
- ↑ a b Freshney, R. Ian (2010). Culture of animal cells : a manual of basic technique and specialized applications 6th ed. Hoboken, N.J.: Wiley-Blackwell. pp. 208–211. ISBN 9780470528129
- ↑ a b Davis, edited by John M (2011). Animal cell culture. Oxford: Wiley-Blackwell. pp. 239–240. ISBN 978047066658-6
- ↑ Butterworth, Alice S; Robertson, Alan J; Ho, Mei-Fong; Gatton, Michelle L; McCarthy, James S; Trenholme, Katharine R (2011). «An improved method for undertaking limiting dilution assays for in vitro cloning of Plasmodium falciparum parasites». Malaria Journal. 10 (1). 95 páginas. ISSN 1475-2875. doi:10.1186/1475-2875-10-95
- ↑ Rout, Namita; Else, James G.; Yue, Simon; Connole, Michelle; Exley, Mark A.; Kaur, Amitinder (2 de julho de 2010). «Heterogeneity in phenotype and function of CD8+ and CD4/CD8 double-negative Natural Killer T cell subsets in sooty mangabeys». Journal of Medical Primatology. 39 (4): 224–234. doi:10.1111/j.1600-0684.2010.00431.x
- ↑ Lilienfeld, Benjamin G.; Crew, Mark D.; Forte, Pietro; Baumann, Bettina C.; Seebach, Jörg D. (1 de março de 2007). «Transgenic expression of HLA-E single chain trimer protects porcine endothelial cells against human natural killer cell-mediated cytotoxicity». Xenotransplantation. 14 (2): 126–134. doi:10.1111/j.1399-3089.2007.00378.x
- ↑ Seki, Yoshihiro; Suzuki, Satoshi O.; Masui, Kenta; Harada, Shiori; Nakamura, Seiji; Kanba, Shigenobu; Iwaki, Toru (1 de junho de 2011). «A simple and high-yield method for preparation of rat microglial cultures utilizing Aclar plastic film». Neuropathology. 31 (3): 215–222. doi:10.1111/j.1440-1789.2010.01163.x
Ligações externas editar
- Robert Staszewski "Cloning by Limiting Dilution: an improved estimate that an interesting culture is monoclonal" [1]
- John A. Ryan "Cell Cloning by Serial Dilution in 96 Well Plates".
- Vilma Maldonado,Jorge Meléndez-Zajgla "A modified method for cloning adherent mammalian cells".
- "Cloning by Limiting Dilution".[ligação inativa]
- "Cloning by limiting dilution".
- Nanci Donacki "Cloning by Limiting Dilution of Hybridoma".
