Usuário(a):Beatriz.sartori/Testes

Há bactérias que são resistentes à coloração, mas que uma vez coradas vão resistir fortemente à descoloração, mesmo por ácidos fortes diluídos e álcool absoluto. Às bactérias que possuem esta propriedade dizemos que são ácido-álcool resistentes, (BAAR) (géneros Mycobacterium e Nocardia). Esta característica é devida ao elevado teor de lípidos estruturais (ex. ácido micólico) na parede celular destas bactérias, que provoca uma grande hidrofobicidade, dificultando a ação dos mordentes e diferenciadores de corantes aquosos.

A técnica de Ziehl-Neelsen evidencia esta ácido-álcool resistência. Entretanto, a álcool- ácido resistência é variável entre as espécies e implica em uma alteração na técnica. No caso do Mycobacterium tuberculosis a técnica segue o seguinte protocolo:

1. Confeccionar o esfregaço seguindo as técnicas atuais de biossegurança;
2. Cobrir a lâmina com fucsina fenicada 0,3%(o mordente é o ácido fénico);
3. Aquecer a lâmina até à emissão de vapores (é importante não deixar ferver);
4. Aguardar 3 minutos e repetir o processo de aquecer a lâmina outras 3 vezes;
5. Lavar com água corrente;
6. Cobrir a lâmina com álcool-ácido 3% até descorar totalmente o esfregaço;
7. Lavar com água corrente;
8. Cobrir a lâmina com azul de metileno durante 1 minuto;
9. Lavar com água corrente;
10. Secar;
11. Observar em imersão.

No caso do Mycobacterium leprae a técnica segue o seguinte protocolo:

1. Confeccionar o esfregaço seguindo as técnicas atuais de biossegurança;
2. Cobrir a lâmina por 20 minutos com fucsina fenicada 1% (o mordente é o ácido fénico);
3. Lavar com água corrente;
4. Cobrir a lâmina com álcool-ácido 1% até descorar totalmente o esfregaço;
5. Lavar com água corrente;
6. Cobrir a lâmina com azul de metileno 0,3% durante 5 minutos;
7. Lavar com água corrente;
8. Secar;
9. Observar em imersão.

A fucsina fenicada, atuando a quente, vai corar todas as células bacterianas e outras estruturas presentes no esfregaço de vermelho (o calor vai derreter os lípidos de membrana, tornando-a permeável). O ácido diluído em álcool aplicados vão descorar todas as bactérias exceto as ácido-álcool resistentes, que permanecem coradas de vermelho pela fucsina. Assim, ao serem observadas após coloração e contraste, com azul de metileno, encontraremos as bactérias:

• Ácido-álcool resistentes: coradas de vermelho.
• Não ácido-álcool resistentes: coradas de azul.